資訊平臺(tái) B2B電商平臺(tái)
在線客服
|
點(diǎn)擊 4899回答 0
2023-05-02 16:06
色譜柱的維護(hù)與再生 已關(guān)閉
 懸賞分：0
色譜柱的維護(hù)與再生
色譜柱的維護(hù) 色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱： 1、色譜柱維護(hù)的注意事項(xiàng)很多，第一：請(qǐng)參考說明書 2、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度和壓力的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行。 3、一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。 4、選擇使用適宜的流動(dòng)相，以避免固定相被破壞。 5、避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者（并且）在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。 6、經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)，如甲醇。在進(jìn)行清洗時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右。 7、避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相； 8、實(shí)驗(yàn)完畢應(yīng)將柱子沖洗干凈； 9、嚴(yán)格控制進(jìn)樣量，不要超載； 11、每天分析測(cè)定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣砬逑粗詈糜孟疵撃芰?qiáng)的洗脫液沖洗。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應(yīng)用無鹽流動(dòng)相沖洗。 12、裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔4~5天開機(jī)沖洗15分鐘。 13、色譜柱存在pH穩(wěn)定范圍，在使用過程中盡量不超過該色譜柱的pH范圍。 14、絕對(duì)禁止將緩沖液留在柱內(nèi)過夜 15、反相柱不能用純水長(zhǎng)時(shí)間沖洗。 16、不建議拆開柱子，自己更換填料。 色譜柱的保護(hù) 色譜柱在吸附樣品時(shí)，樣品中所含有的鹽、脂質(zhì)、疏水蛋白質(zhì)和其它一些生物物質(zhì)都有可能與色譜柱發(fā)生相互作用，一些保留值較小的物質(zhì)如鹽類比較容易被沖出色譜柱，而一些保留性較強(qiáng)的組分，流動(dòng)相溶液不足以把這些物質(zhì)洗脫下來，多次上樣后，這些吸附在柱子表面的物質(zhì)通常就會(huì)積累在柱頭。當(dāng)這些被吸附的樣品成分累積到一定程度足以使之形成新的固定相而改變分離機(jī)理，以致樣品保留時(shí)間會(huì)波動(dòng)，會(huì)出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象。 為了延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，前面已經(jīng)指出，應(yīng)在分析柱前連接一個(gè)小體積的保護(hù)柱。保護(hù)柱通常填充和分析柱相同的填料(固定相)，可看作是分析柱的縮短形式，安裝在分析柱前。其作用是收集、阻斷來自進(jìn)樣器的機(jī)械和化學(xué)雜質(zhì)，以保護(hù)和延長(zhǎng)分析柱的使用壽命。一只1cm長(zhǎng)的保護(hù)柱就能提供充分的保護(hù)作用。若選用較長(zhǎng)的保護(hù)柱，可降低污染物進(jìn)入分析柱的機(jī)會(huì)，但會(huì)引起譜帶擴(kuò)張。因此選擇保護(hù)柱的原則是在滿足分離要求的前提下，盡可能選擇對(duì)分離樣品保留低的短保護(hù)柱。 保護(hù)柱也可裝填和分析柱不同的填料，如較粗顆粒的硅膠(10～15 μm)或聚合物填料，但柱體積不宜過大，以降低柱外效應(yīng)的影響。保護(hù)柱裝填的填料較少，價(jià)格較低，其為消耗品，通?？煞治?0～100次樣品，柱壓力降呈現(xiàn)增大的趨向就是需要更換保護(hù)柱的信號(hào)?，F(xiàn)在市場(chǎng)供應(yīng)可更換柱芯式設(shè)計(jì)的保護(hù)柱，由保護(hù)柱套和可更換式保護(hù)柱芯兩部分組成。 保護(hù)柱與分析柱的連接示意圖  1-保護(hù)柱套；2-保護(hù)柱芯；3-PEEK標(biāo)準(zhǔn)通用接頭；4-分析柱接頭；5-連接六通進(jìn)樣閥接頭 色譜柱的保存 硅膠、氧化鋁或正相鍵合相柱，應(yīng)保存在流動(dòng)相中。氰基柱不能保存在純有機(jī)溶劑(如甲醇或乙腈)中，應(yīng)保留在欲使用的流動(dòng)相中；氨基柱最好保存在乙腈中，而非流動(dòng)相，并且應(yīng)注意不可使用丙酮作流動(dòng)相。 反相柱應(yīng)保存在純甲醇溶劑中，對(duì)填充高交聯(lián)度苯乙烯-二乙烯基苯共聚微球的非極性固定相也可用此法保存。 色譜柱的再生 對(duì)使用時(shí)間較長(zhǎng)、柱效逐漸下降的色譜柱，可用下述方法進(jìn)行快速再生，以除去微量不潔雜質(zhì)在柱頭的聚積，不同的色譜柱清洗方法各不相同： 正相柱：依次以20～30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴(yán)格脫水。 反相柱：用極性溶劑每種30mL，按以下順序清洗：5％-10%甲醇水溶液、0.5mol/L H3PO4(或0.1mol/L EDTA鈉鹽)、5％甲醇水溶液、甲醇、甲醇-氯仿(1：1)混合液、甲醇、5％甲醇水溶液，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積。最后保存在甲醇溶劑中。 離子交換色譜柱：長(zhǎng)時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣,將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降。用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽(yáng)離子柱再生,反之,用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。另外，還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動(dòng)相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的。 當(dāng)色譜柱的性能變得很差時(shí)，可采用下述兩種方法，作最后的補(bǔ)救： 1，修補(bǔ)柱頭并同時(shí)更換不銹鋼燒結(jié)片。當(dāng)取下燒結(jié)片發(fā)現(xiàn)柱頭塌陷或填料被雜質(zhì)污染時(shí)，可挖掉0.5mm左右的固定相，再重新填充同樣的干燥固定相，用少量流動(dòng)相潤(rùn)濕，再填充干燥的固定相與柱口平齊(必要時(shí)用光滑的不銹鋼棒壓緊)，如此重復(fù)3～5次。再換上新的不銹鋼燒結(jié)過濾片，擰緊結(jié)頭，與高壓泵連接，用流動(dòng)相沖洗20min，若柱壓力降恢復(fù)正常，可連接檢測(cè)器，測(cè)柱效。若柱效恢復(fù)就可繼續(xù)使用。若柱壓力降恢復(fù)正常，但柱效仍偏低，表明柱頭未填充緊密，仍有空隙，此時(shí)應(yīng)重復(fù)上述操作，直至柱壓力降恢復(fù)正常、柱效也恢復(fù)正常才可繼續(xù)使用。 2，倒沖色譜柱。此法適用于已修補(bǔ)過柱頭，柱壽命已達(dá)中后期的色譜柱。柱逆向使用后柱效會(huì)損失較大(約30％)，倒沖柱可檢查柱頭不銹鋼燒結(jié)片是否堵塞。若已堵塞在倒沖柱時(shí)，可觀察到柱壓力降減小，待柱壓力降恢復(fù)正常，再將色譜柱按原方向安裝使用。 由中國(guó)石油和化工網(wǎng)機(jī)械設(shè)備編輯部整理 歡迎業(yè)內(nèi)人士和專家補(bǔ)充指正
點(diǎn)贊 0反對(duì) 0舉報(bào) 0
收藏 0
分享 65
|
廣告經(jīng)營(yíng)許可證：京海工商廣字第0394號(hào)
在線留言
